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雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)方法

2016-03-10 09:30 來源:
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雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)方法:

原理常用于定性檢測,也可用于半定量檢測。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi),讓它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在最適當(dāng)比例處相遇時(shí),即形成一條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線,可用已知的抗體鑒定未知的抗原,或用已知的抗原鑒定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白,作為原發(fā)性肝癌的早期輔助診斷。

甲種胎兒蛋白(α-Fetal protein, AFP),是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第9周才出現(xiàn)此種蛋白,13~19周達(dá)高峰,到21周后逐漸下降,胎兒出生后該蛋白即行消失或含量甚微,普通試驗(yàn)方法檢查不出,而肝癌病人及個(gè)別卵巢癌或睪丸癌病人的血清檢出有此種蛋白。

材料

1.抗AFP血清、已知肝癌病人AFP陽性血清、待檢病人血清。

2.1.2%瓊脂(用生理鹽水配成)。

3.載玻片、毛細(xì)吸管、濕盒。

方法

1.制備瓊脂玻片 將已知加熱溶化的1.2%瓊脂3.5ml,迅速傾入載玻片上。

2.打孔 待凝固后用打孔器按下圖樣打孔。(孔徑3mm,孔距4mm)

3.加樣 以上方孔為第1孔醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理,按順時(shí)針方向分別稱為2、3、4、5和6孔,中央孔為7孔。7孔加入抗AFP血清,1、4孔加入已知AFP陽性血清(或AFP),作為陽性對(duì)照孔;6孔加入已知AFP陰性血清,作為陰性對(duì)照孔,其余2、3、5孔為試驗(yàn)孔,加入待檢血清。

4.溫育 置濕盒室溫或37℃溫育12-24 h.

結(jié)果觀察

1、4孔與7孔間應(yīng)出現(xiàn)白色沉淀線,6與7孔間應(yīng)不出現(xiàn)白色沉淀線。若2、3、5孔與7孔間出現(xiàn)白色沉淀線而且與陽性對(duì)照沉淀線吻合者,即為實(shí)驗(yàn)陽性,表明待檢血清中含有AFP(即AFP陽性)。如出現(xiàn)與陽性對(duì)照相連接,且呈槍刺狀如上右圖中4與5孔間,說明二者間有共同抗原成分;如出現(xiàn)成交叉的沉淀線,則是非特異性沉淀反應(yīng),為假陽性反應(yīng),乃判為實(shí)驗(yàn)陰性,表明待檢血清為AFP陰性。

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