免疫標(biāo)記的技術(shù)：

1.免疫熒光

免疫熒光技術(shù)是用熒光素標(biāo)記的抗體或（抗原）分子檢測相對應(yīng)的抗原或抗體分子的技術(shù)。

（1）直接熒光法：把熒光素標(biāo)記的抗體與待檢標(biāo)本（細(xì)胞懸液、細(xì)胞涂片或組織切片）相互作用，洗去未結(jié)合熒光標(biāo)記抗體，在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部分為陽性。

（2）間接熒光法：將特異性抗體（一抗）和待檢標(biāo)本（細(xì)胞懸液、細(xì)胞涂片或組織切片）相互作用后加入熒光素標(biāo)記的一抗的抗體（二抗）顯示結(jié)果。

免疫熒光法在病原體的診斷、細(xì)胞表面標(biāo)志的鑒定等方面用途廣泛。流式細(xì)胞儀（FACS）是用于分離、鑒定熒光素標(biāo)記單克隆抗體識別細(xì)胞的儀器。

2.放射免疫分析

根據(jù)競爭結(jié)合原理，應(yīng)用放射性核素標(biāo)記的抗原與相應(yīng)的抗體（抗原）結(jié)合，通過抗原抗體復(fù)合物的放射性活性判斷結(jié)果。

（1）液相法：將待檢標(biāo)本（含抗原）與定量的放射性核素標(biāo)記的已知抗原和定量的特異抗體混合，經(jīng)一定時間的作用后，分別測定免疫復(fù)合物和游離部分的放射性。根據(jù)用非標(biāo)記抗原作成的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可確定待檢樣品中相應(yīng)抗原的含量。

（2）固定法

將吸附到固相載體表面的抗原與待檢標(biāo)本（含抗體）作用，然后加標(biāo)記抗體。測定結(jié)合于固相載體的放射性，判定結(jié)果。

放射免疫分析法在激素、藥物、抗體、維生素的測定等方面應(yīng)用廣泛。

3.酶免疫分析

（1）免疫酶染色：酶標(biāo)抗體和抗原（如組織切片上的抗原）發(fā)生特異性結(jié)合后，加入酶底物。底物在酶的催化下生成有色的物質(zhì)。

（2）酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）

①間接法：將已知的抗原包被在固相載體的表面，加入待檢標(biāo)本（含特異性抗體），再加入酶標(biāo)記抗Ig抗體（第二抗體）。加底物顯色，根據(jù)顏色的光密度判定標(biāo)本中抗體的含量。

②夾心法：將已知的特異性抗體包被在固相載體表面，加入待檢標(biāo)本（含抗原），標(biāo)本中的抗原和包被的抗體結(jié)合。沖洗后，加入該抗原的酶標(biāo)抗體，加底物顯色。根據(jù)顏色的光密度判定標(biāo)本中抗原的含量。

（3）ELISPOT測定法：用某種細(xì)胞因子的抗體包被固相載體（如96孔板），加入待檢細(xì)胞，經(jīng)孵育后，如待檢細(xì)胞分泌了細(xì)胞因子，這些因子被包被的抗體捕獲。洗去細(xì)胞，加細(xì)胞因子特異性抗體。洗去未結(jié)合抗體。加底物顯色后，可出現(xiàn)有顏色斑點。根據(jù)斑點的數(shù)量可判定細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的數(shù)量，根據(jù)斑點的深淺，也可判定此細(xì)胞因子的相對含量。醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理

4.化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記技術(shù)

是用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)（如魯米諾）標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行抗體或抗原檢測的方法。其結(jié)果用發(fā)光光度計來檢測。

5.免疫印跡試驗

將抗原物質(zhì)用聚丙烯酰胺凝膠電泳分帶后轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，用酶標(biāo)或放射性核素標(biāo)記的抗體識別和結(jié)合抗原，加底物顯色或做放射自顯影顯示結(jié)果。該法能測定待檢蛋白質(zhì)的分子量和特異性。應(yīng)用該法檢測血清中的HIV抗體是確認(rèn)HIV感染的方法。