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B細(xì)胞數(shù)目及功能的檢測

B細(xì)胞數(shù)目及功能的檢測:

原發(fā)性免疫缺陷和繼發(fā)性免疫缺陷均可導(dǎo)致體液免疫功能下降。原發(fā)性體液免疫功能缺陷可能由于B細(xì)胞分化障礙,細(xì)胞內(nèi)合成Ig功能紊亂或由于抑制性細(xì)胞功能過強(qiáng)。繼發(fā)性體液免疫功能降低可能由于蛋白質(zhì)大量丟失,蛋白質(zhì)吸收障礙、營養(yǎng)不良、免疫抑制治療的副作用,病毒感染(艾滋病)等。在診斷原發(fā)性體液免疫功能缺損中可檢查B細(xì)胞的數(shù)目和功能以確定造成缺損的原因。

1.外周血B細(xì)胞數(shù)目的檢測首先進(jìn)行常規(guī)的外周血白細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)檢查,這些結(jié)果是評價病人免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)的基本資料。由于在全血中淋巴細(xì)胞所占比例很少,而T細(xì)胞和B細(xì)胞不能藉形態(tài)學(xué)特征分類,所以外周血B細(xì)胞數(shù)檢測需先從全血分離出富含淋巴細(xì)胞的單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBM)。再依靠B細(xì)胞表面有免疫球蛋白分子或其他特征來檢查B細(xì)胞。常用的方法是將待檢者的PBM用FITC標(biāo)記的免疫抗人Ig作直接免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下顯熒光的細(xì)胞為帶有表面免疫球蛋白的B細(xì)胞。正常人B細(xì)胞的約占PBM的10%.

2.外周血B細(xì)胞功能的檢測 分離受檢者血液PBM細(xì)胞,體外培養(yǎng)時加入B細(xì)胞刺激物如RWM(美洲商陸刺激素)或SAC(金黃色莆萄球菌來源的刺激物)后由B細(xì)胞變成Ig分泌細(xì)胞的數(shù)量。體液免疫功能缺損患者,其PBM對PWM和SACA刺激的反應(yīng)降低,產(chǎn)生Ig分泌細(xì)胞數(shù)正常人顯著減少。在進(jìn)一步檢查這種免疫缺損的原因,則應(yīng)檢查是由B細(xì)胞或TH細(xì)胞缺損所致,還是由于TS細(xì)胞數(shù)量或活性增強(qiáng)引起的。

抗體形成細(xì)胞計(jì)數(shù):檢查人類Ig分泌細(xì)胞是用反向溶血空斑檢測 (reversed hemolytic plaque assay)法。將待檢人的PBM、用SPA包被的SRBC(SPA-SRBC)、兔抗人Ig抗體、補(bǔ)體四種成分混合,灌入用兩張玻片做成的小室,密封好,放入溫箱培養(yǎng)1-3小時,,在此期間,作為抗人Ig抗體的免疫IgG的FC段可與SRBC表面SPA結(jié)合,當(dāng)Ig分細(xì)胞分泌出游離的Ig分子時,這些人Ig分子與SRBC表面的抗人Ig抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物,即可活化補(bǔ)體,使SPA-SRBC溶解,因此在Ig分泌細(xì)胞周圍形成一個圓形的溶血區(qū),稱為溶血空斑,每一個溶血的空斑就代表一個Ig分泌細(xì)胞。

檢查小鼠Ig分泌細(xì)胞應(yīng)用的溶血空斑試驗(yàn)比較簡單,即SRBC免疫注射小鼠,4天后取脾制成單個細(xì)胞懸液,加入一定量SRBC(靶細(xì)胞)混合,在補(bǔ)體參加下,產(chǎn)生抗體的細(xì)胞分泌出的Ig與SRBC(抗原)結(jié)合在補(bǔ)體作用下,溶血,表現(xiàn)肉眼可見的溶血空斑。計(jì)數(shù)空斑數(shù)代表分泌抗體的細(xì)胞數(shù)。

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