體外毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)是公衛(wèi)執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師考試的重點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編為大家整理了相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)，希望對(duì)參加2017年公衛(wèi)執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師考試的考生有所幫助：

此處簡(jiǎn)要討論在遺傳毒理學(xué)體外試驗(yàn)共同考慮的幾個(gè)問(wèn)題。

1．測(cè)定受試物溶解性應(yīng)該測(cè)定受試物在試驗(yàn)介質(zhì)中的溶解性。已注意到在試驗(yàn)系統(tǒng)暴露期內(nèi)，受試物的溶解性可能改變，因?yàn)榇嬖诩?xì)胞、S9、血清等。因此，在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)評(píng)價(jià)溶解性是有意義的。溶解性限度就是出現(xiàn)沉淀的最低濃度。

2．試驗(yàn)最高劑量的推薦對(duì)可溶性受試物濃度高于10mmol/L時(shí)可因高滲透壓在哺乳動(dòng)物細(xì)胞引起損傷或人工假象，對(duì)細(xì)菌則無(wú)此影響。由于受試物的分子量并不一定知道(如聚合物或混合物)，因此，在大多數(shù)情況下，可溶性受試物的試驗(yàn)上限應(yīng)該是：(1)對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞為10mmol/L或5mg/ml。(2)對(duì)細(xì)菌試驗(yàn)為5mg/平板。當(dāng)受試物供應(yīng)困難或非常昂貴(如生物藥劑)，最高劑量低于10mmol/L或5mg/ml(或／平扳)是可以接受的。

對(duì)不溶性受試物最高濃度的推薦有爭(zhēng)論，日本學(xué)者的資料表明，有的受試物僅在沉淀劑量于細(xì)菌試驗(yàn)和染色體畸變?cè)囼?yàn)中出現(xiàn)遺傳毒性。哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有吞噬作用，細(xì)菌不具有吞噬作用。一般認(rèn)為無(wú)毒性的可溶于適當(dāng)?shù)娜軇┒�不溶于�?shí)驗(yàn)培養(yǎng)液(介質(zhì))中的受試物，最高濃度應(yīng)是溶解性限制(即產(chǎn)生沉淀的最低濃度)，但不應(yīng)干擾終點(diǎn)的計(jì)數(shù)。

對(duì)于有毒性的受試物，最高濃度在細(xì)菌試驗(yàn)中應(yīng)該是明顯顯示毒性的劑量，對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞試驗(yàn)最高劑量，基因突變?cè)囼?yàn)應(yīng)達(dá)到10％～20％存活率，而染色體畸變和UBS試驗(yàn)應(yīng)達(dá)到50％存活率。

對(duì)于沒(méi)有適當(dāng)溶劑，完全不溶的受試物，則可以按5mg/平板或10mmol/L(5mg/ml)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)雜質(zhì)的致突變性�；蛘撸�采用生理鹽水提取物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.代謝活化代謝活化常規(guī)使用Aroclor1254（多氯聯(lián)苯1254）預(yù)處理的雄性成年大鼠肝勻漿90000g離心上清液(S9)，及相應(yīng)的輔因子(NADPH再生系統(tǒng))。由于各國(guó)禁用限用多氯聯(lián)苯，可用苯巴比妥和β-萘黃酮聯(lián)合誘導(dǎo)制備S9(El1iott，1992)。對(duì)體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞試驗(yàn)，還可利用大鼠肝原代培養(yǎng)細(xì)胞等作為代謝活化系統(tǒng)。

4.陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照的劑量應(yīng)選擇其劑量-反應(yīng)的直線部分，并且構(gòu)成歷史性資料(歷史性對(duì)照)，并以其作為實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制的措施之一

5.重復(fù)由質(zhì)控良好的實(shí)驗(yàn)得到明確的陰性結(jié)果和陽(yáng)性結(jié)果，不強(qiáng)調(diào)要求重復(fù)。可疑結(jié)果則應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，最好改變劑量范圍／劑量間隔、改變S9濃度或改變實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行重復(fù)。

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