首先協(xié)助患者側(cè)臥于病床上，背部與床面垂直。頭向前胸部屈曲，雙手抱膝緊貼腹部，使軀干呈弓形。

然后確定穿刺部位：一般取“雙側(cè)髂嵴最高點(diǎn)的連線”與“后正中線”的交點(diǎn)，即：第3～4腰椎棘突間隙作為進(jìn)針部位。（也可上移或下移一個(gè)腰椎間隙）

完成上述步驟后，戴無(wú)菌手套，常規(guī)消毒皮膚2～3遍；消毒時(shí)以穿刺點(diǎn)為圓心，由內(nèi)向外，消毒直徑15cm的區(qū)域；

消毒后，覆蓋無(wú)菌洞巾，選取2%利多卡因做局部浸潤(rùn)麻醉，先在穿刺點(diǎn)斜行進(jìn)針，在皮下打一小皮丘，然后垂直緩慢進(jìn)針，直至椎間韌帶逐層麻醉。

局部浸潤(rùn)麻醉后，以左手固定穿刺點(diǎn)皮膚，右手持穿刺針，垂直背部緩慢刺入。進(jìn)針深度成人約4～6cm（兒童則為2～4cm）。當(dāng)針?shù)h抵抗感突然消失時(shí)，表明針頭已穿過(guò)硬脊膜，此時(shí)將針芯慢慢抽出，可見(jiàn)腦脊液流出；

然后連接測(cè)壓管，測(cè)量腦脊液壓力。正常情況下，側(cè)臥位腦脊液壓力為70～180mmH2O（或40～50滴／分鐘）。

撤去測(cè)壓管，將針芯插入穿刺針，再根據(jù)檢測(cè)要求收集適量腦脊液送檢。

最后，緩慢拔出穿刺針，用無(wú)菌紗布覆蓋按壓穿刺點(diǎn)3～5分鐘，并用膠布固定。

穿刺結(jié)束后，囑咐患者去枕平臥（也可取俯臥位）休息4～6小時(shí)，以避免引起低顱壓性頭痛。