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基因工程基本原理-口腔醫(yī)師輔導(dǎo)

  基因工程基本原理:一個(gè)完整的基因克隆過程應(yīng)包括:目的基因的獲取,克隆基因載體的選擇與改造,目的基因與載體的連接,重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞,篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞.醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)整理。實(shí)現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶,如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類識(shí)別DNA特意序列的內(nèi)切核酸酶。

  一、目的基因的獲?。?/strong>

  外源基因又稱目的基因,來源于幾種途徑:化學(xué)合成、酶促合成cDNA,制備的基因組DNA及PCR技術(shù)。細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的載體。

  二、基因載體的選擇與構(gòu)建:

  可作為基因載體的DNA分子有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA,它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力,或兼有表達(dá)外源基因的能力。

  三、外源基因與載體的連接:

  連接方式有:黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

  四、重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞:

  外源DNA與載體在體外連接成重組DNA分子,需將其導(dǎo)入宿主細(xì)胞。隨受體細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖,重組DNA分子得以復(fù)制、擴(kuò)增。

  五、重組體的篩選:

  鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組DNA分子確實(shí)帶有目的基因,即可得到目的基因的克隆,這一過程即為篩選或選擇。

  六、克隆基因的表達(dá):

  在原核或真核表達(dá)體系中進(jìn)行表達(dá),獲得所需要的蛋白質(zhì)。

  例題(單選):在分子生物學(xué)領(lǐng)域中,分子克隆主要是指:

  A.DNA的大量復(fù)制

  B.DNA的大量剪切

  C.RNA的大量復(fù)制

  D.RNA的大量剪切

  E.反轉(zhuǎn)錄酶

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